Javascript è attualmente disabilitato nel tuo browser.Diverse funzionalità di questo sito non funzioneranno mentre javascript è disabilitato.accesso aperto alla ricerca scientifica e medicaDalla presentazione alla prima decisione editoriale.Dall'accettazione editoriale alla pubblicazione.La suddetta percentuale di manoscritti è stata respinta negli ultimi 12 mesi.Riviste scientifiche e mediche peer-reviewed ad accesso libero.Dove Medical Press è membro dell'OAI.Ristampe in blocco per l'industria farmaceutica.Offriamo vantaggi reali ai nostri autori, inclusa l'elaborazione accelerata degli articoli.Registra i tuoi dettagli specifici e farmaci specifici di interesse e abbineremo le informazioni fornite agli articoli dal nostro ampio database e ti invieremo prontamente copie PDF via e-mail.Torna a Riviste » Rivista internazionale di nanomedicina » Volume 10 » Numero 1Autori Marslin G, Selvakesavan RK, Franklin G, Sarmento B, Dias ACPPubblicato il 22 settembre 2015 Volume 2015:10(1) Pagine 5955—5963DOI https://doi.org/10.2147/IJN.S81271Revisione da parte di Single anonimo peer reviewEditore che ha approvato la pubblicazione: Dr Thomas J WebsterGregory Marslin,1 Rajendran K Selvakesavan,1 Gregory Franklin,1 Bruno Sarmento,2,3 Alberto CP Dias1 1Centre for the Research and Technology of Agro-Environment and Biological Sciences (CITAB-UM), AgroBioPlant Group, Department of Biology, University of Minho, Braga, Portogallo;2Instituto de Engenharia Biomédica (INEB), Università di Porto, Porto, Portogallo;3CESPU, Instituto Universitário de Ciências da Saúde, Gandra, Portogallo Riassunto: Riportiamo sull'attività antimicrobica di una formulazione in crema di nanoparticelle d'argento (AgNP), biosintetizzate utilizzando l'estratto di Withania somnifera.Gli estratti acquosi di foglie hanno promosso un'efficiente sintesi verde di AgNPs rispetto ai frutti e agli estratti di radice di W. somnifera.Gli AgNP biosintetizzati sono stati caratterizzati per la loro dimensione e forma mediante tecniche fisico-chimiche come la spettroscopia UV-visibile, l'anemometria laser Doppler, la microscopia elettronica a trasmissione, la microscopia elettronica a scansione, la microscopia a forza atomica, la diffrazione dei raggi X e la spettroscopia dispersiva dell'energia dei raggi X.Dopo aver confermato il potenziale antimicrobico degli AgNP, sono stati incorporati in una crema.Le formulazioni in crema di AgNPs e AgNO3 sono state preparate e confrontate per la loro attività antimicrobica contro agenti patogeni umani (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Escherichia coli e Candida albicans) e un patogeno vegetale (Agrobacterium tumefaciens).I nostri risultati mostrano che le creme AgNP possiedono un'attività antimicrobica significativamente più elevata contro gli organismi testati.Parole chiave: Withania somnifera, sintesi verde, crema di nanoparticelle d'argento, attività antimicrobicaLa nanotecnologia e i nanostrumenti hanno guadagnato molta attenzione grazie alla loro vasta gamma di applicazioni in fisica, chimica, biologia, scienze dei materiali e medicina.1 Le nanoparticelle metalliche come argento, oro e rame sono state utilizzate per la diagnosi e il trattamento delle malattie a causa della loro azione catalitica. , proprietà ottiche, elettroniche, antimicrobiche e magnetiche.2 Le nanoparticelle d'argento (AgNP) sono generalmente sintetizzate con metodi fisici e chimici come la riduzione elettrochimica e l'evaporazione termica,3–5 ma questi metodi richiedono molto tempo e sono difficili da aumentare.Inoltre, questi metodi non sono sicuri per l'ambiente a causa dell'uso di sostanze chimiche tossiche.Un metodo che potrebbe evitare tutte le limitazioni sopra menzionate è la scelta ideale per preparare AgNPs.Recentemente, è stato dimostrato che diversi estratti vegetali possono subire un assemblaggio altamente controllato e gerarchico, il che li rende adatti allo sviluppo di un processo affidabile ed ecologico per la sintesi di nanoparticelle metalliche.6–11Withania somnifera (L.) Dunal, (Solanaceae), comunemente nota come ashwagandha o ciliegia d'inverno, è una pianta medicinale molto nota nella medicina ayurvedica.I principali composti attivi includono diversi composti di tipo withanolide.12,13 A causa dell'alto valore medicinale non tossico di W. somnifera (WS), questa pianta è ampiamente utilizzata in tutto il mondo.Le radici, e meno spesso foglie e frutti, sono state utilizzate come fitomedicine sotto forma di decotto, infusi, unguenti, polvere e sciroppo.12–14 Oggi questa pianta è coltivata come coltura per sostenere l'elevata domanda di biomassa e un qualità sostenibile per le esigenze dell'industria farmaceutica.15 In questo studio, abbiamo biosintetizzato AgNPs utilizzando l'estratto di WS e identificato i composti responsabili della formazione di AgNPs.Per dimostrare le potenziali applicazioni farmaceutiche e industriali degli AgNP sintetizzati, abbiamo sviluppato una formulazione in crema per AgNP e valutato l'attività antimicrobica in una gamma di microrganismi.Preparazione dell'estratto vegetale WSLe piante WS sono state raccolte dal Pondicherry Botanical Garden (Pondicherry, India).Foglie, frutti e radici sono stati essiccati all'ombra a 25°C e polverizzati.Gli estratti acquosi di WS (2%, 4%, 6% e 8%, p/v) sono stati preparati facendo bollire foglie, frutti e biomassa radicale separatamente in flaconi Erlenmeyer da 500 ml contenenti 100 ml di acqua distillata sterile per 1 ora.Gli estratti acquosi sono stati ottenuti mediante centrifugazione a 10.000 rpm per 10 minuti seguita da filtrazione.Abbiamo proiettato diversi estratti di WS per la formazione di AgNPs.Innanzitutto, sono stati aggiunti 10 mL di soluzione di AgNO3 1 mM ad aliquote da 500 μL di diverse concentrazioni (2%, 4%, 6% e 8%, p/v) di estratti acquosi di WS di radici, foglie e frutti.La reazione è stata lasciata avvenire in matracci tarati da 25 mL a temperatura ambiente;le soluzioni sono state agitate su vortice (5 minuti) tre volte al giorno e monitorate continuamente per i cambiamenti di colore, che è un'indicazione per la conversione di AgNO3 in AgNPs.Contemporaneamente, aliquote sono state prelevate e analizzate per l'assorbanza a 300–700 nm in uno spettrofotometro UV-visibile (UV-vis).Dopo la formazione di AgNPs, la soluzione è stata centrifugata a 20.000 rpm per 15 minuti e i surnatanti sono stati scartati.Le nanoparticelle sono state lavate con 10 ml di acqua deionizzata, centrifugate di nuovo e il supernatante è stato scartato.Infine, gli AgNP sono stati ridispersi in 10 ml di acqua deionizzata.Poiché gli AgNP sono stati formati in modo efficiente nell'estratto di foglie acquoso al 6% p/v, abbiamo scelto questo estratto per un'ulteriore standardizzazione della concentrazione di AgNO3.In breve, sono state preparate diverse concentrazioni di AgNO3 (0,1, 0,5, 1 e 2 mM) e sono stati aggiunti 10 ml di ciascuna concentrazione all'estratto di foglie al 6% p/v ed è stata registrata la formazione di nanoparticelle.Poiché la combinazione di estratto di foglie al 6% e AgNO3 1 mM è risultata ottimale, gli AgNP sintetizzati con questa combinazione sono stati utilizzati in tutti gli ulteriori esperimenti.Analisi della dimensione delle particelle e del potenziale zetaLe dimensioni e il potenziale zeta degli AgNP sono stati determinati mediante anemometria laser Doppler utilizzando uno Zetasizer (Zetasizer nano ZS; Malvern Instruments, Malvern, Regno Unito).In breve, 100 μL di nanoparticelle sono stati diluiti a 1 mL con acqua deionizzata.È stato applicato un campo elettrico di 150 mV per osservare la velocità elettroforetica delle particelle.16 Tutte le misurazioni sono state effettuate a temperatura ambiente.Sono stati eseguiti tre campioni indipendenti, in triplicato.La caratterizzazione morfologica degli AgNP è stata eseguita mediante analisi di microscopia elettronica a trasmissione (TEM) e analisi di microscopia elettronica a scansione (SEM).Per le analisi TEM, gli AgNP sono stati colorati negativamente con una soluzione all'1% di acetato di uranile di sodio e analizzati utilizzando TEM (JEOL-1400, 902A; JEOL, Tokyo, Giappone).17 Per l'analisi SEM, i campioni sono stati preparati facendo cadere la sospensione di nanoparticelle su mozziconi di alluminio e lasciarli asciugare all'aria.Le particelle essiccate all'aria sono state ricoperte con oro sotto vuoto utilizzando uno strumento Fiscon SC 502 e osservate al SEM (Leica Cambridge S 360; Leica Microsystems, Wetzlar, Germania) per l'imaging.L'analisi della spettroscopia a dispersione di energia a raggi X è stata condotta con lo stesso strumento per confermare la composizione elementare del campione.La morfologia superficiale degli AgNP è stata studiata mediante microscopia a forza atomica.Una goccia di AgNPs è stata posta su un vetrino da 2×2 mm2 e lasciata fino a quando il liquido non fosse evaporato.Le immagini sono state registrate utilizzando la modalità tapping in aria su uno strumento NanoScope IIa multimodale dotato di uno scanner J (Veeco Instruments, Santa Barbara, CA, USA) e nanoprob di silicio (NCHV; Veeco Instruments).Tutte le immagini (600 nm di larghezza) sono state adattate a un piano utilizzando la procedura di appiattimento di 1 grado inclusa nella versione del software NanoScope 4.43r8.Uno studio di diffrazione di raggi X di AgNP è stato eseguito utilizzando un diffrattometro a raggi X (Philips PW1710; Philips Co., Amsterdam, Paesi Bassi) con un goniometro orizzontale.I campioni sono stati posti nel portacampioni e scansionati a una velocità di 1° al minuto da 0° a 70°.Gli AgNP e gli estratti acquosi fogliari di WS sono stati analizzati mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni con rivelatore a matrice di diodi (HPLC-DAD) (Merck Hitachi LaChrom Elite; Merck KGaA, Darmstadt, Germania).18 In breve, 2 ml di AgNP sono stati centrifugati e pellettizzati Gli AgNP sono stati estratti con 1 mL di metanolo al 50%.La soluzione di estratto di AgNPs e gli estratti di foglie di WS sono stati filtrati (membrana Nylaflo 0,45 μM) prima dell'analisi HPLC.Aliquote di questi campioni (20 μL) sono state iniettate direttamente nel sistema HPLC.Le separazioni cromatografiche sono state effettuate a 30°C su una colonna LiChrospher RP-18e (Merck KGaA) utilizzando acido acetico allo 0,1% in acqua (soluzione A) e acido acetico allo 0,1% in acetonitrile (soluzione B) come fasi mobili ad una portata di 0,7 ml/min.È stato utilizzato il seguente gradiente: da 0 a 30 minuti, la fase mobile è stata ridotta dal 55% al ​​10% di A. I dati sono stati registrati nell'intervallo 200–520 nm e i cromatogrammi sono stati registrati a 235 e 350 nm.I composti presenti nel campione sono stati quantificati utilizzando standard esterni di catechina, acido p-cumarico, luteolin-7-glucoside (Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO, USA) e withanolides (Natural Remedies, Bangalore, India).Screening di AgNO3, estratto di foglie di WS e AgNPs per l'attività antimicrobicaIl potenziale antibatterico preliminare di AgNPs e dei componenti utilizzati nella sintesi (AgNO3 ed estratto di foglie WS) è stato testato contro Escherichia coli mediante il metodo di diffusione del disco.In breve, aliquote di 100 μL di coltura di E. coli sono state distribuite su piastre Petri contenenti terreno di brodo Luria (LB) solidificato con agar.Sul terreno sono stati collocati dischi di carta sterile (5 mm di diametro) impregnati con concentrazioni equivalenti di AgNPs (20 μL), estratto di foglie WS e soluzione di AgNO3.Come controllo sono stati usati dischi di carta impregnati con acqua (20 μL).Le piastre sono state incubate a 37°C per 24 ore e sono state misurate le zone di inibizione.Preparato in crema con AgNPs e sua attività antimicrobicaLa formulazione in crema con AgNPs è stata preparata con Croda Base CR2 (EMFAL, MG, Brasile).In breve, CR2 è stato preparato ad una concentrazione del 15% (p/v) in acqua ultrapura (controllo) o in una soluzione contenente l'1% di AgNO3 (crema AgNO3) o AgNPs equivalenti (crema AgNPs).Le attività antimicrobiche delle creme sono state valutate mediante il metodo dell'unità formante colonia.In breve, a 950 μL di colture microbiche coltivate (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Proteus vulgaris, E. coli, Agrobacterium tumefaciens), sono stati aggiunti 50 μL di crema (AgNO3, AgNPs o crema contenente solo acqua) a varie diluizioni e mantenuto a 37°C.Le colture con 50 μL di acqua sono servite come controllo positivo.Dopo 24 ore, 100 μL di ciascun trattamento e controllo sono stati piastrati su terreno agar LB utilizzando uno spargitore a T sterile.Le unità formanti colonie in ciascuna piastra sono state contate dopo incubazione notturna.Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti in quadruplicato.Sintesi verde di nanoparticelle d'argentoTra le diverse concentrazioni di estratti di WS e AgNO3 utilizzati per la sintesi di nanoparticelle, 6% p/v WS e 1 mM AgNO3 hanno mostrato profili di reazione migliori e sono stati selezionati per ulteriori studi.Quando è stato aggiunto AgNO3, l'estratto acquoso di foglie è cambiato in un colore rossastro (Figura 1A), mentre gli estratti di frutta e radice non hanno cambiato colore entro 7 giorni.L'assorbanza UV-vis a 430 nm ha confermato la riduzione dello ione argento in metallo argentato a causa della reazione con i componenti presenti nell'estratto fogliare acquoso di WS (Figura 1B).Era evidente che l'estratto di foglie di WS contiene composti adatti alla sintesi del verde, mentre gli estratti di radice e di frutta no.Recentemente, è stata segnalata la sintesi fotosensibilizzata di AgNP tramite l'uso di polvere di foglie WS.19Figura 1 Biosintesi di AgNPs.Note: Fotografia che mostra la formazione di AgNP utilizzando l'estratto di Withania somnifera e l'osservazione visiva dei cambiamenti di colore (A).Spettri UV-vis di AgNP sintetizzati utilizzando il 6% di estratto acquoso di Withania somnifera con 1 mM di AgNO3 a diversi intervalli di tempo (B).Abbreviazioni: AgNPs, nanoparticelle d'argento;OD, densità ottica;UV-vis, ultravioletto-visibile.La dimensione delle particelle e la distribuzione dimensionale sono caratteristiche importanti delle nanoparticelle, poiché ne determinano il destino biologico, la tossicità, la capacità di mira e la stabilità.Gli AgNP sintetizzati avevano una dimensione compresa tra 70 e 110 nm, come confermato dall'analisi dell'anemometria laser Doppler (Figura 2A).Il potenziale zeta è risultato essere -30,0 ± 1,8 mV, indicando la stabilità della formulazione.Figura 2 Caratterizzazione morfologica di AgNPs.Note: distribuzione delle dimensioni delle particelle (A), immagine TEM (B), immagine altezza AFM (C), immagine primaria SEM (D), immagine retrodiffusa (E) e spettro dispersivo dell'energia dei raggi X (F), di AgNPs.Abbreviazioni: TEM, microscopia elettronica a trasmissione;AgNPs, nanoparticelle d'argento;AFM, microscopia a forza atomica;SEM, microscopia elettronica a scansione.Le immagini TEM, microscopia a forza atomica e SEM di AgNPs sono correlate ai dati di diffusione della luce dinamica e hanno mostrato particelle con una forma sferica (Figura 2B-E).Gli AgNP erano più luminosi e facilmente identificabili dalla luce retrodiffusa nelle immagini SEM, poiché metalli come l'argento mostrano un'emissione di elettroni secondari più elevati (Figura 2D-E).Spettro di spettroscopia dispersiva di energia a raggi X di AgNP sintetizzati (Figura 2F) mostrava chiaramente la presenza di metallo argento elementare.Il forte picco del segnale dell'argento ha confermato la riduzione del nitrato d'argento ad argento da parte delle nanoparticelle.La natura cristallina degli AgNP è stata confermata dall'analisi di diffrazione dei raggi X (Figura 3).L'intensità dei picchi riflette l'alto grado di cristallinità degli AgNPs.I picchi di diffrazione distinti a 38,06, 44,23 e 67,43 sono stati indicizzati con piani (111), (200) e (220).L'intenso pattern di diffrazione dei raggi X ha mostrato chiaramente la formazione di AgNP (carta JCPDS n. 04-0783, 1991).20 Amutha et al hanno riportato lo stesso pattern di picco di diffrazione a 32,16 e indicizzato con piano (101) in AgNP biosintetizzati a temperatura ambiente .Allo stesso modo, abbiamo ottenuto un picco a 32.20 che è stato indicizzato con piano (101).21Figura 3 Modelli XRD degli AgNP sintetizzati con estratto acquoso di foglie di Withania Somnifera.Abbreviazioni: XRD, diffrazione dei raggi X;AgNPs, nanoparticelle d'argento.Composti WS responsabili della sintesi verde di AgNPsSebbene la sintesi verde di AgNPs sia stata segnalata utilizzando estratti di diverse specie vegetali, le conoscenze sui fitocomposti responsabili della sintesi verde sono ancora carenti.È stato proposto che i fenolici come la catechina possano agire come agente riducente, stabilizzante e incappucciante.22,23Al fine di identificare i composti WS che partecipano alla sintesi verde di AgNP, abbiamo eseguito l'analisi HPLC.Abbiamo identificato diversi withanolidi nell'estratto di foglie WS in base ai loro caratteristici spettri UV-vis (Figura 4A-D; Tabella 1).Inoltre, l'analisi HPLC di AgNPs ha rivelato che alcuni dei composti fenolici presenti nell'estratto di foglie WS erano selettivamente intrappolati nelle nanoparticelle (Figura 4C e D).Questi composti, sulla base dei loro caratteristici spettri UV-vis e dell'ulteriore conferma mediante coeluzione con standard puri, sono stati identificati come catechina, acido p-cumarico e luteolin-7-glucoside (Figura 4C e D e Tabella 1).Queste sostanze erano mascherate da altri importanti composti (picchi) presenti nell'estratto di WS, ovvero i withanolidi;i composti catechina, acido p-cumarico e luteolin-7-glucoside sono stati notati nei cromatogrammi di AgNP poiché erano intrappolati selettivamente in AgNP e gli altri composti sono stati rimossi quando le nanoparticelle sono state lavate.Inoltre, negli AgNP è stato trovato un composto principale (picco 4) che non è stato identificato nell'estratto acquoso di foglie WS originale.Questo composto aveva spettri UV-vis simili ad altri withanolidi trovati nell'estratto acquoso fogliare (picchi W2, W5 e W6) ma con un tempo di ritenzione diverso e mostrava un effetto batocromico sui suoi spettri.Tenendo conto di ciò, questo composto potrebbe essere un derivato originato dall'interazione di un derivato withanolide con ioni argento.Quindi, possiamo concludere che la formazione di AgNPs ha comportato l'interazione di ioni argento con fenolici selezionati e withanolidi presenti nell'estratto acquoso di foglie WS.Recentemente è stata segnalata la rilevanza dei composti fenolici per la sintesi verde di nanoparticelle metalliche dalla corteccia di Eucalyptus globulus.24Figura 4 Cromatogrammi HPLC di estratto acquoso di foglie di Withania somnifera e AgNP sintetizzati in verde.Note: (A e B) cromatogramma HPLC dell'estratto acquoso di foglie di Withania somnifera registrato a 235 e 350 nm.W1–W6 sono composti di tipo Whitanolide.(C e D) Cromatogramma HPLC di AgNP registrati a 235 e 350 nm.Il picco 1 indica la catechina;il picco 2 indica acido p-cumarico;il picco 3 indica il luteolin-7-glucoside;e il picco 4 indica un composto di tipo Whitanolide.Abbreviazioni: AgNPs, nanoparticelle d'argento;HPLC, cromatografia liquida ad alte prestazioni.Tabella 1 Tempo di ritenzione dei composti presenti nell'estratto acquoso di foglie di Withania somnifera e AgNPs Abbreviazioni: AgNPs, nanoparticelle d'argento;W, biancanolide.È noto che un certo numero di forme chimiche di argento esibiscono attività antimicrobiche.25 Gli AgNP hanno mostrato una zona di inibizione batterica più ampia rispetto all'AgNO3 in tutti i batteri analizzati (E. coli, P. aeruginosa e A. tumefaciens) (Figura 5A-C ).L'interazione di AgNP con le cellule di E. coli è stata studiata utilizzando l'analisi SEM (Figura 6).Le cellule trattate con AgNPs (2 ore e 4 ore) hanno mostrato una maggiore interruzione nella parete cellulare delle cellule di E. coli con un maggiore intervallo di tempo.Nessuna interruzione è stata osservata nelle cellule non trattate, indicando chiaramente la maggiore attività antibatterica degli AgNP (Figura 6A-C).I risultati del metodo di conteggio delle colonie hanno mostrato che gli AgNP hanno ridotto significativamente il numero di cellule di E. coli da 106 a 1,3 ± 0,9 CFU/mL, mentre la riduzione con il trattamento con AgNO3 è stata di 258,6 ± 9,9 CFU/mL e non è stata osservata alcuna riduzione con Trattamento con estratto acquoso WS (Figura 7).Questi risultati confermano ulteriormente la maggiore attività antimicrobica (~ 200 volte più efficace) degli AgNP rispetto a quantità equivalenti di AgNO3.È stato riportato che gli AgNP mostrano un'attività maggiore rispetto alle loro controparti AgNO3.26 Inoltre, gli AgNP biosintetizzati da estratti vegetali hanno mostrato una maggiore attività antibatterica rispetto agli AgNP sintetizzati chimicamente.27Figura 5 Attività antibatterica degli AgNP analizzati con il metodo della diffusione del disco.Note: crescita batterica senza trattamenti (1) o trattati con quantità equivalente di estratto acquoso di Withania somnifera (2), AgNO3 (3) e AgNPs (4).I batteri testati erano Escherichia coli (A), Pseudomonas aeruginosa (B) e Agrobacterium tumefaciens (C).Abbreviazione: AgNPs, nanoparticelle d'argento.Figura 6 Analisi SEM dell'interazione tra AgNP e Escherichia coli.Note: Interazione cellulare di AgNPs ed E. coli visualizzata mediante analisi SEM: controllo (A), dopo 2 ore (B) e 4 ore (C) di incubazione.Abbreviazioni: AgNPs, nanoparticelle d'argento;SEM, microscopia elettronica a scansione.Figura 7 Potenziale antibatterico di AgNP con il metodo di conteggio delle colonie.Note: Escherichia coli senza trattamento (solo acqua) (A), E. coli trattato con estratto vegetale (B), E. coli trattato con AgNO3 (C) ed E. coli trattato con AgNPs (D).Abbreviazione: AgNPs, nanoparticelle d'argento.La letalità degli AgNP può verificarsi attraverso meccanismi quali il danneggiamento delle proteine ​​cellulari batteriche, l'interruzione della membrana cellulare, il blocco del sistema della catena respiratoria microbica e la penetrazione di nanoparticelle nel citoplasma.28,29 La maggiore attività antibatterica degli AgNP, rispetto all'AgNO3, potrebbe essere dovuto anche alla presenza di WS fenolici nelle nanoparticelle.È noto che alcuni fenolici possiedono attività antimicrobiche o potenziano l'attività degli antibiotici, aumentandone l'efficacia.È stato dimostrato che composti come i flavoni e i derivati ​​della catechina, strutturalmente simili a quelli identificati in WS e AgNPs, mostrano una scarsa attività antimicrobica.30,31 Diverse catechine del tè in combinazione con oxacillina (antibiotico β-lattamico) hanno mostrato un aumento dell'inattività fino a 128 -fold contro diversi ceppi di S. aureus.31 Alcuni meccanismi antimicrobici dei fenolici sono correlati all'inattivazione della pompa di efflusso e alla destabilizzazione della membrana citoplasmatica,30 che potrebbero spiegare gli effetti osservati (analisi SEM) di AgNPs nelle cellule batteriche (Figura 6) e il loro maggiore attività rispetto all'estratto AgNO3 o WS da solo (Figura 7).Le creme antibiotiche vengono utilizzate per accelerare la guarigione delle ferite e prevenire le infezioni.L'attività antibatterica delle creme incorporate con AgNO3 e AgNPs è stata confrontata con una crema vuota, contro isolati microbici clinici patogeni di S. aureus, P. aeruginosa, C. albicans, P. vulgaris, E. coli e il patogeno vegetale A. tumefaciens.I risultati hanno mostrato che la crema con AgNPs ha ridotto significativamente il numero di colonie contro tutti i patogeni testati rispetto alla crema contenente AgNO3 (Tabella 2).Questi risultati confermano ulteriormente la maggiore attività antimicrobica della crema AgNPs contro i batteri Gram-positivi, S. aureus (~ 200 volte più efficace), rispetto alla crema AgNO3.Allo stesso modo, anche i batteri Gram-negativi come P. aeruginosa, P. vulgaris, E. coli e A. tumefaciens hanno mostrato una maggiore riduzione delle CFU quando trattati con AgNP (31 volte, 43 volte, 28 volte e 13 volte di più, rispettivamente, rispetto ad AgNO3).Gli AgNP hanno anche mostrato un'attività antimicrobica 20 volte maggiore rispetto all'AgNO3 nelle specie fungine C. albicans.Questi risultati hanno evidenziato che gli AgNP hanno un potenziale antimicrobico più elevato contro i patogeni Gram-positivi, Gram-negativi e fungini.I prodotti a base di argento con proprietà antimicrobiche sono impiegati in diversi settori come quello medico (es. creme antibatteriche), alimentare (es. agenti antibatterici negli imballaggi) e tessile (es. preparazione di lane d'argento).32,33 L'incorporazione dell'argento come le nanoparticelle sono state considerate una soluzione alternativa, rendendo queste industrie più sicure per l'ambiente.33 Le creme WS AgNP e WS AgNP biosintetizzate hanno mostrato una forte attività antimicrobica, superiore alle loro controparti AgNO3 (Figura 7 e Tabella 2).Le formulazioni d'argento (gel, creme, ecc.) sono ampiamente utilizzate nel settore sanitario, in particolare nella cura delle ferite.32,33 La crema AgNPs prodotta con il metodo descritto in questo lavoro potrebbe essere utilizzata con vantaggio per lo stesso scopo;essendo più efficace (antimicrobico), può essere utilizzato a dosi più basse e con minore tossicità per il paziente, ma allo stesso tempo più ecologico.Tabella 2 Valutazione del potenziale antimicrobico della crema incorporata con AgNPs Note: i dati sono stati analizzati mediante t-test non parametrico utilizzando il software GraphPad Prism 5 (GraphPad, La Jolla, CA, USA).I dati sono presentati come media ± SEM di quattro repliche.Gli asterischi denotano una differenza statisticamente significativa rispetto al controllo dell'acqua (*P<0,05, ***P<0,001).I simboli più indicano una differenza statisticamente significativa di AgNPs (++P<0,01, +++P<0,001) rispetto a diverse concentrazioni di AgNO3.Abbreviazioni: AgNPs, nanoparticelle d'argento;SEM, microscopia elettronica a scansione;CFU, unità formatrice di colonie.In conclusione, gli estratti di foglie acquose di WS sono adatti per la sintesi verde di AgNP con una potente attività antimicrobica.Ciò è molto rilevante poiché la biomassa di questa pianta è considerata un prodotto di scarto dall'industria fitofarmaceutica e quindi può essere utilizzata per ulteriori processi economici.Inoltre, i risultati hanno mostrato che i composti catechina, acido p-cumarico, luteolin-7-glucoside e un derivato withanolide non identificato presente nell'estratto acquoso di foglie WS sono responsabili della sintesi verde di AgNPs.Lo studio antimicrobico conclude che gli AgNP sono 200 volte più potenti rispetto all'AgNO3 Gli AgNP agiscono distruggendo la membrana cellulare di E. coli, come confermato dall'analisi SEM.Questi AgNP e AgNP incorporati in crema hanno una potenziale applicazione in molti settori diversi tra cui medico, alimentare e tessile.Questo lavoro è stato sostenuto da Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT), progetti (PTDC/AGR-ALI/105169/2008 e PTDC/AGR-GPL/119211/2010).Gregory Marslin è supportato da una borsa di studio FCT PhD (SFRH/BD/72809/2010).Gli autori non segnalano conflitti di interesse in questo lavoro.Karuppiah M, Rajmohan R. 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